五、利用適配子連接
P8 #;a 適配子是人工合成的具有一個以上限制酶識別位點的短序列，它具有一個平端，可與其它DNA的平端連接，同時它還有某種限制酶的突出端，可與含互補的限制酶突出端的DNA片段連接，連接后，用適當的限制酶切割又可產生所需要的突出粘端。
};m.Y>=)K 第五節 重組DNA導入宿主菌
40VdT|n$$ 體外連接的重組DNA分子必須導入適當的受體細胞中才能大量的復制、增殖和表達。根據所采用的載體的性質，將重組DNA分子導入受體可有不同的方法。
?R2`RvQ 一、轉化
S (;3gQ77 指以細菌質粒為載體，將外源基因導入受體細胞的過程。轉化時，細菌必須經過適當的處理使之處于感受態－即容易接受外源DNA的狀態，然后利用短暫熱休克使DNA導入細菌宿主中。
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Q O 此外還可用電穿孔法轉化細菌，它的優點是操作簡便、轉化效率高、適用于任何菌株。
H}KJd5A7 二、轉染和感染
!M]_CPh] 利用噬菌體DNA作為載體時可經兩種方式導入受體菌。一種是感染，即在體外將噬菌體DNA包裝成病毒顆粒，然后使其感染受體菌。另一種方式是轉染，即在DNA連接酶作用下使噬菌體DNA環化，再象重組質粒一樣地轉化進受體菌。但習慣上常把以噬菌體DNA為載體構建成的重組子導入細胞的過程統稱為轉染。
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第六節 重組克隆的篩選與鑒定
0> jo+b\D$ 基因克隆的最后一步是從轉化細菌菌落中篩選出含有陽性重組子的菌落，并鑒定重組子的正確性。通過細菌培養以及重組子的擴增，獲得所需的基因片段的大量拷貝。進一步研究該基因的結構、功能，或表達該基因的產物。
X2#;1 ku 一、抗藥性標志的篩選
-#XNZy!// 如果克隆載體帶有某種抗藥性標志基因如ampr或tetrr ，轉化后只有含這種抗藥基因的轉化子細菌才能在含該抗菌素的平板上幸存并形成菌落，這樣就可將轉化菌與非轉化菌區別開來。如果重組DNA時將外源基因插入標志基因內，該標志基因失活，通過有無抗菌素培養基對比培養，還可區分單純載體或重組載體（含外源基因）的轉化菌落。
dm4dT59 二、β－半乳糖苷酶系統篩選
kzs}U'U 很多載體都攜帶一段細菌的lacZ基因，它編碼β－半乳糖苷酶N-端的146個氨基酸，稱為α－肽，載體轉化的宿主細胞為lacZΔ15基因型，它表達β－半乳糖苷酶的C-端肽鏈，當載體與宿主細胞同時表達兩個片段時，宿主細胞才有β－半乳糖苷酶活性，使特異的底物X-gal 變為蘭色化合物，這就是所謂的α－互補，而重組子由于基因插入使α－肽基因失活，不能形成α－互補，在含X-gal的平板上，含陽性重組子的細菌為無色菌落或噬菌斑。
Vab+58s5 三、菌落快速裂解鑒定法
R!7emc0T 從平板上直接挑選菌落裂解后，直接電泳檢測載體質粒大小，判斷有無插入片段存在，該法適于插入片段較大的重組子初篩。
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